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液相色谱仪选型心得 更多

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  hujiangtao

  Waters Acquity UPLC使用心得

  Waters Acquity UPLC使用心得Waters Acquity UPLC是单位于2009年购置的，第一次使用超高效液相色谱，被超快速的分析时间震撼了。例如原来牛奶中糠氨酸检测一直用Waters 2695，糠氨酸极性强，10min左右就出峰了，但梯度程序却要运行时间40 min，因为要把牛奶中保留性强的基质洗脱干净不然会影响下一针样品，还要加上几分钟平衡时间；而UPLC 8 min梯度程序就可以搞定，分离度比2695还要好一些，大大提高了工作效率，节省流动相试剂，特别适合大批量样品检测。与传统HPLC相比，UPLC最大的优点就是快速、分离度好，以前建立、优化一个液相方法可能需要几天（多组分单针运行时间一般都需要几十分钟），UPLC多数半天就可以搞定（多组分梯度程序一般10 min都可以搞定），这主要得益于整个液相耐高压系统（该仪器可耐受15000 PSI）和亚2 um粒径填料色谱柱的高塔板数。但随之带来的问题是这种色谱柱特别容易堵，特别是像含蛋白、脂肪、磷脂等基质多的样品，有次接到几百批次大豆中大豆异黄酮检测任务，尽管前处理时样品已经经过C18 SPE小柱净化，然而进样不到一百次就发现系统压力超过15000 PSI，打开色谱柱前端发现筛板上存在明显油脂痕迹，应该是导致系统超压的主要原因，换新筛板后压力明显下降，但分离效果也出现一定程度下降，基本做完这几百个样品柱子就不能使用了，可见亚2 um色谱柱抗污染能力确实比普通5 um柱子差一些，而且UPLC单根色谱柱价格也要比HPLC贵不少。所以对于预算充足、样品量很大的单位UPLC可以大幅提高工作效率，但从成本-效益角度考虑，普通HPLC更适合像企业内部实验室等需要严格核算投入-产出比例的实验室，因为UPLC能分析的组分普通HPLC也完全能够胜任，只不过需要的分析检测时间长一些、流动相消耗多一些。

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  万事皆空-没个性

  安捷伦液相色谱仪使用分享

  安捷伦液相色谱仪使用分享

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  Agilent 1260 Infinity LC -- 无限信心

  Agilent 1260 Infinity LC -- 无限信心1.    简介        安捷伦科技公司是惠普公司的子公司，于 1999 年 11 月 18 日打破了硅谷历史上规模最大的首次公开募股 (IPO) 的记录。从 IPO 中筹集的 21 亿美元与创始人 Bill Hewlett 和 Dave Packard 于 1938 年开始的 538 美元营运资金形成鲜明对比。从加利福尼亚州帕洛阿尔托的一个小车库，到为全球 110 个国家/地区的客户提供服务的员工, 安捷伦在通信、电子、半导体、测试和测量、生命科学和化学分析行业拥有悠久的创新和领导地位。        安捷伦1260 Infinity系列新品于2010年7月发布。1260 Infinity LC 提供更好的快速高分离度的分离能力，将 RRLC 的性能推向新的水平。1260 Infinity 单元泵和四元泵系统最高耐压 600 bar ，可轻松使用亚二微米填料或表面多孔层填料（新型 Poroshell 色谱柱填料）的 3.0 和 4.6 mm 内径色谱柱。 1260 Infinity 二元液相色谱采用高压溶剂混合，在 600 bar 的压力和最高 5 mL/min 的流速下仍可具有卓越的梯度精度，由于系统延迟体积更低，因此非常适合使用窄径柱。    此外，全新的 1260 Infinity 二极管阵列检测器将 UV 灵敏度提高了 10 倍，从而使色谱峰的检测和积分更加准确。    1260 Infinity LC 可使 HPLC 和 RRLC 方法完全兼容，既可运行现有方法，同时系统随时又可以在需要时换用现代色谱柱技术。 1260 Infinity 四元液相色谱还包括一款具有 100% 生物惰性的液相色谱系统，可在 pH 1-14 的最宽 pH 范围内使用。    1260 Infinity LC 将让常规液相色谱的用户充分感受 UHPLC 技术的高性能。图1 1260 G1311C+G7129A+G1316A+G1314B+FLD2.    背景    第一次接触1260是在2014年4月11日，因为我还保留着当时安装时的验收报告。之前只用过岛津的20A和10A，手动进样+N2000工作站。用了1260+Chemstation后才知道原来还能这么干。    安捷伦对1200 Infinity系列 LC提供了很全面的应用手册，用户可以很方便的查询很多信息图2 丰富的手册图3 手册中的信息3. 硬件    G1311C四元泵可是在线混合流动相，不用再手动配制也免去配制好的剩余流动相的贮存问题。G1329B可以实现不同体积进样，而且可以实现很好的平行性。且推杆速度可调，可以针对不同粘度的样品设置不同的进样速度。图4 进样速度G1329B 还可以实现程序进样，可以用于添加内标（液相用内标法少），一次进多个样品，也可用来做柱前衍生。安捷伦官方提供的氨基酸分析包既是用自动进样器做柱前衍生。图5 进样程序G1314F检测器同样可以实现时间程序。比如有两个化合物，先出峰的一个最佳波长为210nm，另一个为330nm。如果想同时测定这两个化合物，就可以设置初始波长为210nm，等第一个峰出来后，再切换只330nm来实现。另外G1314F同样可以做波长扫描，早目标峰刚出来时停泵，然目标化合物刚好在流通池内，此时使用时间程序的波长扫描功能对化合物做扫描。然后提取光谱图来判断最佳检测波长。同时可以实现关灯冲洗系统，只需设置一方法，在方法中设置取消选中“采集期间需要开启灯”。4. 维护液相最怕的就是堵和漏，所以常做的维护也是针对这两方面的。安捷伦也有全面的维护手册，维护视频。图6 维护视频Labadvisor可以很方便的对系统做EMF计数检测，硬件测试，固件更新等操作图7 固件更新图8 EMF计数器图9 各种测试另外，1260不少部件和1100通用，我曾经用1100的电源替换了1260的电源。可以参见安捷伦1260 G1316A柱温箱“心脏骤停，那就更换一颗老心脏”https://bbs.aomen-bcwz.top/topic/7890124。不管是DAD还是VWD，也都支持第三方的灯，只需要取消选中“仅使用有标记的灯”即可。1260搭配Chemstation真是液相分析的利器。再加上第三方公司提供的硬件，可以在手机上实时监测仪器状态。图10 状态监控5. 不足    1260的柱温箱G1316A柱温箱如果装250mm的柱子，再加上保护柱的话，会有点小，不好装进去。当然安捷伦提供的保护柱是带一根细管子的，可以弯起来。    Chemstation 只能提供流动相预警，不能估算运行当前序列流动相是否充足，也不能估算废液瓶剩余体积。    G1311C四元泵的密封垫清洗组件为选配，如果不选配都不能手动清洗。好吧，这些都是小问题，用了1260后再也不想用手动的20A和自动的16A了。